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微生物的幾種檢測(cè)方法之生長(zhǎng)量測(cè)定法

更新時(shí)間:2021-03-04      點(diǎn)擊次數(shù):5929

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一、生長(zhǎng)量測(cè)定法
 
1、體積測(cè)量法:又稱測(cè)菌絲濃度法
通過(guò)測(cè)定一定體積培養(yǎng)液中所含菌絲的量來(lái)反映微生物的生長(zhǎng)狀況.方法是,取一定量的待測(cè)培養(yǎng)液(如 10毫升)放在有刻度的離心管中,設(shè)定一定的離心時(shí)間(如5分鐘)和轉(zhuǎn)速(如5000 rpm),離心后,倒出上清夜,測(cè)出上清夜體積為v,則菌絲濃度為(10-v)/10.菌絲濃度測(cè)定法是大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長(zhǎng)的一個(gè)重要監(jiān)測(cè)指標(biāo).這種方法比較粗放,簡(jiǎn)便,快速,但需要設(shè)定一致的處理?xiàng)l件,否則偏差很大,由于離心沉淀物中夾雜有一些固體營(yíng)養(yǎng)物,結(jié)果會(huì)有一定偏差。
 
2、稱干重法
可用離心或過(guò)濾法測(cè)定.一般干重為濕重的10-20%.在離心法中,將一定體積待測(cè)培養(yǎng)液倒入離心管中,設(shè)定一定的離心時(shí)間和轉(zhuǎn)速,進(jìn)行離心,并用清水離心洗滌1-5次,進(jìn)行干燥.干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干,或采用紅外線烘干,也可在80℃或40℃下真空干燥,干燥后稱重.如用過(guò)濾法,絲狀真菌可用濾紙過(guò)濾,細(xì)菌可用醋酸纖維膜等濾膜過(guò)濾,過(guò)濾后用少量水洗滌,在40℃下進(jìn)行真空干燥.稱干重發(fā)法較為煩瑣,通常獲取的微生物產(chǎn)品為菌體時(shí),常采用這種方法,如活性干酵母(activity dry yeast, ADY),一些以微生物菌體為活性物質(zhì)的飼料和肥料。
 
3、比濁法
微生物的生長(zhǎng)引起培養(yǎng)物混濁度的增高.通過(guò)紫外分光光度計(jì)測(cè)定一定波長(zhǎng)下的吸光值,判斷微生物的生長(zhǎng)狀況.對(duì)某一培養(yǎng)物內(nèi)的菌體生長(zhǎng)作定時(shí)跟蹤時(shí),可采用一種特制的有側(cè)臂的三角燒瓶.將側(cè)臂插入光電比色計(jì)的比色座孔中,即可隨時(shí)測(cè)定其生長(zhǎng)情況,而不必取菌液.該法主要用于發(fā)酵工業(yè)菌體生長(zhǎng)監(jiān)測(cè).如我所使用UNICO公司的紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì),在波長(zhǎng)600nm 處用比色管定時(shí)測(cè)定發(fā)酵液的吸光光度值OD600,以此監(jiān)控E.Coli的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)時(shí)間.
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